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中药SOS1基因的克隆及功能分析

来源: bet365网页版 作者: 28365365体育备用网 发布时间:2019-01-29
中华鳖分泌盐SOS1基因的克隆及功能分析
道威卫
摘要:盐胁迫是影响植物生长发育的非生物因子之一。
大多数土壤盐化导致植物中Na +的过量积累,这会影响植物的生长。
对于耐盐植物在生理盐水的环境中成长,耐盐性克隆的基因及其以盐生植物,对植物的作用机制的耐盐性的新知识,相关的遗传学功能研究资源的利用,转基因盐厂栽培,改良盐土,有效利用。
在该实验中,分泌物盐Halofita L.吸虫(LimoniumsinenseKuntze)材料,不同的盐浓度,在酶活性的叶和抗氧化剂SOS1吸虫草药基因表达的初始应力响应研究。L.吸虫SOS1基因克隆(LsSOS1),向量过表达构建体,中国血液在拟南芥和LsSOS1的基因的融合基因LsSOS1-GFP的表达和过表达沉默和干扰草坪的表达载体遗传转化。
我们用纯洁的承诺和LsSOS1转基因拟南芥沉默转基因中华补血草遗传分析,获得的研究和观察局部LsSOS1耐盐性的观察,表达LsSOS1。
关于基因在LsSOS1盐渍植物中华鳖盐过程中的重要作用的详细信息。
主要实验结果如下。
(1)当盐浓度不同时,应激反应和基因表达幼苗sinensis L. LsSOS 1
在CURVED实验中,在低浓度Rimoniumu盐的比控制,如盐浓度生长,根系生长逐渐抑制。
当NaCl浓度超过200毫摩尔/ L,L.吸虫盐水应力叶片根部表达LsSOS1基因以上增加。
低叶中草药的抗氧化酶活性(2)盐胁迫
L. sinensis在低盐度的过程中,酶活性控制各种系统的活性氧物质去除相比有显着变化。
然而,通过提高NaCl浓度,L.盐胁迫,所述酶的增加由于吸虫(SOD,POD,APX,CAT)的活性氧摄取活性。
被记载在特定的浓度范围内,补血草及其盐自身独特的抗氧分泌酶系统,通过调整盐抵抗引起的应力的盐机构的损坏,以维持正常的生长。
分析克隆和测序(3)基因L. sinensis LsSOS 1
其它物种中保守的SOS1基因序列,设计简并引物的方法,通过RACE LsSOS1基因序列克隆含有开放阅读框3456个核苷酸,编码1152个氨基酸残基的推定的蛋白,最多同源补血SOS1基因(Limonium gmelinii SOS1)已达到97%并且它编码Na + / H +逆向转运蛋白。
过表达(4)LsSOS1异源研究基因
他们筛选出10条LsSOS1转基因拟南芥线,三个纯合转基因株系的选择是生理生化分析和分子生物学研究。
实时PCR分析LsSOS 1对拟南芥基因表达水平的影响
在不同的NaCl浓度下,良好的发芽和比野生型的转基因植物的生长,转基因植物具有在野生型植物盐增加,新鲜的转基因植物和K的Na +的干重+/比率更高。Salvajetipo,但转基因植物之间的差异尚不清楚。
(5)表达产物LsSOS1的亚细胞定位分析
选择性P35S过表达:转基因拟南芥LsSOS1-GFP。
用共聚焦显微镜观察由GFP的绿色荧光确定的产物的LsSOS 1的表达和定位。
最初鉴定的LsSOS1在细胞膜或细胞壁上表达,但不在细胞质或眼内压形成细胞中表达。
为了进一步证实,在细胞质膜中,细胞收缩可以是血浆降解的甘露醇,然后可以观察到。
通过优化分析吸虫无声的革命(6)LsSOS1RNAi的L.胁迫耐受性的基因遗传转化,外植体的转化率达到20%是LsSOS1RNAi沉默将其过滤转基因线30。
测量三种菌株并且基因表达指示生理学和生物化学LsSOS 1。
实时荧光定量PCR分析表明,转基因L. sinensis SOS 1的沉默表达水平低于野生型基因。
在NaCl的过程中,转基因植物从低野生型,盐阻力减小,鲜重,干重和转基因植物的K + /钠离子比率增加是比野生型低。
[学位奖励单位]:[烟台大学学位:理学硕士课程][年份:2014][DOI:Q 943]
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